6-INFEZIONI INTESTINALI BATTERICHE

Come si valuta il significato di un isolamento batterico? Secondo i famosi postulati di Koch!

1) Isolamento del sospetto patogeno nel malato,2) assenza del patogeno nei controlli sani,3) inoculo del sospetto patogeno in un modello animale e suo reisolamento nel corso della malattia infettiva.

A chi cercare l'eventuale patogeno  ? Come e quando cercarlo? Valutiamo questi parametri clinici:

Questi sono i sintomi cardine da valutare nel caso di sospetta infezione intestinale.Quali sono i patogeni da ricercare? Nel caso di diarrea nosocomiale in ricoverati da lameno 3 giorni per patologia di altra origine è chiaro da questa tabella che solo il Clostridium difficile è da prendere in considerazione.

Questa tabella invece mostra i patogeni da ricercare, in prima battuta, in pazienti ricoverati o esterni.

35% di rotavirus fra i ricoverati significa che si ricoverano soprattutto bambini molto piccoli con meno di 4 anni mentre il campylobacter interessa bambini più grandicelli.

Quanti campioni  inviare? Se c'è sintomatologia franca basta un unico campione di feci. La semina va fatta entro 6-8 ore o altrimenti si ricorre al terreno di trasporto . Nei pazienti ospedalizzati da 3-4 giorni con sintomatologia diarroica
RICERCARE IL CL. DIFFICILE IN PRIMA BATTUTA.

I patogeni batterici più comuni sono:
Salmonella
Campylobacter
Shigella
Yersinia
Aeromonas mesofili

Nei casi di tossinfezione alimentare da frutti di mare si sospetta Vibrio parahemolyticus mentre per sintomi che decorrono dopo poco meno di 6 ore dall'ingestione di cibi sospetti si ricerca Staph. aureus o Bacillus cereus. Nei casi che decorrono dopo 12-18 ore dall'ingestione di cibi sospetti ricercare anche Cl. perfringens,  mentre se vi sono SINTOMI NEUROLOGICI SOSPETTARE CL. BOTULINUM! Shigella è rara nei bambini.

I bambini albergano ceppi di Cl. difficile innocui forse per mancanza di recettori negli enterociti. Un buon terreno di traporto è l'enteric plus della unipath. E' ottimo per la ricerca dei Campylobacter , mentre si isolano Salmonelle dalle feci anche senza terreno di traporto specifico. I terreni per la coltura di Campylobacter sono:
al sangue di Skirrow 42 °C,al carbone di Preston o Karmali 37 °C.

fig 6.1 colonie di C. jejuni

I terreni al carbone furono concepiti per un mercato che comprendeva i paesi in via di sviluppo. I supplementi si aggiungono a 45 °C.

In batteriologia i terreni si pesano una volta sola. Si sciolgono e si autoclavano. Quindi si mettono in boccettoni che si tengono da parte. Quando serve il terreno si ridiscioglie mediante FORNO A MICROONDE e si preparano all'istante.Non si pesano le polveri ogni volta. Ottima per la ricerca del Campylobacter è la tecnica della membrana filtrante che è un metodo molto pratico.Si usano i filtri di acetato di cellulosa che sono meglio del nitrato di cellulosa. VANNO BENE ANCHE QUELLI NON STERILI. Le feci vanno sospese non in PBS ma in un brodo ricco tipo Brucella broth . Esistono provette già pronte con palline di vetro per sospendere le feci. Si seminano 6 gocce sulla membrana e si tiene la piastra 30 minuti in termostato. Si toglie la membrana e si incuba in microaerofilia per 3 giorni a 37 ° C. Si osserva un alone sotto la membrana nel comune agar sangue dovuto alle feci acide che hanno emolizzato le emazie. E' un tipico alone di alfa emolisi.

L'aeromonas è coinvolto in casi di osteomielite e diarrea nei pazienti immunocompromessi.Casi di diarrea cronica sono quelli in cui la sintomatologia dura da più di 10 giorni. Aeromonas si isola con agar sangue ampicillina. Aeromonas è resistente alla ampicillina. L'agar sangue serve per il test dell'ossidasi. Sono batteri ossidasi + e questo si vede in agar sangue ampicillina più che nell'altro terreno agar DNA asi blu di toluidina. Concentrazione di ampicillina 20 gamma (=µg/litro).

L'acqua peptonata a ph 8.6 è un buon terreno di arricchimento per i vibrioni. Vibrio cholerae O (lettera) 1 o Vibrio cholerae non O1. Vibrioni si ritrovano in ferite infette da acque marine e isolati in campioni clinici da otiti dei nuotatori. Vibrio è sensibile al composto vibriostatico O/129.

Cl. difficile si esclude se non c'è una anamnesi di assunzione di antibiotici contro cui il Clostridium difficile è resistente.L'infezione da Clostridium difficile prevede la
ricerca di tossine
ricerca in coltura pura
CCFA agar è seminato con feci 48 ore in anaerobiosi. L'odore delle colonie è di urina di cavallo penetrante.La sospensione del terreno in polvere è sbollentata per togliere l'ossigeno con il tappo allentato. E' buona norma ricorrere allo shock etanolico. La sospensione di feci è trattata con uguale volume di etanolo per circa 1 ora a temperatura ambiente. Il Bacteroides fragilis è l'anaerobio più comune nelle feci circa 100:1 rispetto ai clostridi. Tossina di clostridio sulle feci si ricerca con il metodo ELISA. E' molto meglio della coltura perchè se c'è tossina c'è una patologia. La tossina A è citolitica. Kit premiere C. difficile toxin A 96 pozzetti 2 h di incubazione.La tossina è resistente nelle feci e rimane nelle feci anche per molto tempo.Al clinico interessa se c'è la tossina o meno. E' un problema di costo.

GLI ESAMI INTERNI DEVONO ESSERE ACCOMPAGNATI DA RICHIESTA CON I DATI E I SINTOMI SOPRATTUTTO DALLA PEDIATRIA. MENTRE PER GLI ALTRI REPARTI (CHIRURGIE, TERAPIA INTENSIVA) DARE LA PRECEDENZA A CL. DIFFICILE.

modulo di richiesta esame batteriologico

Per i sospetti di  Yersinia fare l'arricchimento a freddo. Il laboratorio di microbiologia non deve trattare gli arricchimenti perchè non interessano i portatori. Il laboratorio di microbiologia fa diagnosi di enterite acuta.   In una unità neonatale c'è stata una epidemia? Sospettare Escherichia coli ceppo H:157 ,tenere le batterie di antisieri e basta (è talmente poco richiesto che non vale la pena comprare l'agar specifico agar Mc Conkey sorbitolo).

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