PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIO No. 4

PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

OBJETIVO

El alumno aplicara algunas pruebas químicas, para detectar la presencia de carbohidratos que se hallen presentes sea como mono, oligo, o polisacáridos.

INFORMACION GENERAL

Los carbohidratos, químicamente son derivados aldehídicos o cetonicos de alcoholes polihidroxilados.

De acuerdo con esta definición tenemos dos grandes familias de carbohidratos, las ALDOSAS (contienen en su molécula al radical aldehído):

O

--C

H

Y las CETOSAS (contienen en su molécula al radical ceto):

O

H

A los carbohidratos, también se les da el nombre de hidratos de carbono, glucidos y azucares.

Se hallan ampliamente distribuidos en la naturaleza, tanto en vegetales como en animales, en los primeros realiza fundamentalmente una función plástica (forman pared de los tejidos de la planta), y en menor grado una función de reserva de energía (como el almidón de las plantas)

En los animales, los carbohidratos constituyen la fuente primaria para la obtención de energía, esta es su principal función; también se les encuentra formando parte de numerosas moléculas, y son a la vez una fuente de reserva de energía a corto plazo (en forma de deposito de glucogeno hepático y muscular).

De acuerdo con el numero de moléculas de que constan, los carbohidratos se pueden clasificar en :

a) Monosacáridos.---formados por solo una unidad (monómeros), ejemplo la glucosa

b) Oligosacaridos. ------ Formados por dos o hasta 8 unidades. Reciben el nombre entonces de di, tri, tetrasacaridos, etc.

Ejemplo: Lactosa (el azúcar de la leche), formada por la unión de glucosa + galactosa (es un disacárido).

Una molécula de un carbohidrato, se une a otro carbohidrato por medio de un enlace llamado glucosidico.

c) Polisacáridos. --- formados por mas de 8 unidades o monómeros, por ejemplo: el almidón (es una cadena formada solo por glucosa, unidas a otras moléculas de glucosa, por enlaces llamados glucosidicos).

MATERIALES	REACTIVOS
18 Tubos de ensayo 120 x 10 mm. 1 gradilla 1 vaso p.p 250 ml 1 mechero 1 tripie 1 tela de asbesto 5 pipetas 5 ml 6 pipetas 1 ml 1 pinza p/ tubo de ensayo	Agua destilada H2SO4 conc. HCL conc HNO3 conc Sol. De lugol Sol. De cromato de potasio 5% Ácido fosforico 85% Sol. Al 1% de glucosa, fructosa y almidón. Sobres con 30 mg de glucosa, sacarosa, lactosa, NaCl. Sol. Alcohólica timol 5% Alfa naftol sol. Alcohólica al 2%

DESARROLLO DE LS EXPERIMENTOS

4.1- Prueba del timol para carbohidratos.

Disponer de tres tubos de ensayo, numerarlos y proceder como muestra el siguiente esquema.

	Tubo 1	Tubo 2	Tubo 3
Glucosa 30 mg	X
Lactosa 30 mg		X
NaCl 30 mg			X
Agua destilada	2 ml	2 ml	2 ml
Sol. Alcohólica timol 5%	3 gotas	3 gotas	3 gotas

AGITAR LA MEZCLA DE CADA TUBO

INCLINAR LOS TUBOS, INTRODUCIR H2SO4 concentrado. Con una pipeta, de tal forma que 0.5 ml de ácido queden bajo la solución acuosa.

Hacer este pasó para cada uno de los tres tubos. SIN AGITAR.

4.1 Resultados esperados

solo los tubos 1 y 2 deben de dar reacción positiva, puesto que son los únicos que contienen carbohidratos.

Para los tubos 1 y 2, se debe observar la aparición de un anillo lechoso central, y en el fondo del tubo se desarrollara un color rojizo naranja ladrillo (tubo 1 y 2), o incluso puede ser café si añade exceso de ácido. Ello se debe a que los carbohidratos presentes reaccionan con el timol.

4.2 – Prueba de ácido nicromico para carbohidratos

Disponer de tres tubo de ensayo, numerarlos, y proceder como se muestra en el siguiente esquema.

	Tubo 1		Tubo 2	Tubo 3
Glucosa 30 mg	X
Almidón 30 mg			X
NaCl 30 mg				X
Agua destilada	3 ml		3 ml	3 ml
HNO3 conc.	3 ml		3 ml	3 ml
Sol. Cromato de potasio al 5%	5 gotas	5 gotas			5 gotas

AGITAR Y DEJAR EN REPOSO POR DOS MINUTOS. OBSERVAR COLOR

4.2- Resultados esperados

Los tubos 1 y 2 deben dar reacción positiva, que se manifiesta por la aparición de un color azul claro en los tubos, ello debido a que la glucosa (libre, o liberada a partir del almidón), es un azúcar reductor; la reducción del cromato de potasio, da el cambio de color.

El tubo 3 permanece amarillo debido a que la sal (NaCl), no es un carbohidrato se reduce por lo tanto al cromato de potasio.

4.3- Prueba del ácido fosforico para cetosacaridos

Marqué dos tubos de ensayo y proceda según el esquema.

	Tubo 1	Tubo 2
Sacarosa 30mg	x
Glucosa 30mg		X
Ac. Fosforico al 85%	1ml	1ml

AGITAR LA MEZCLA, COLOCAR EN BAÑO MARIA POR 1 MIN, RETIRAR Y OBSERVAR COLOR DESARROLLADO.

4.3-Resultados esperados

El tubo No. 1, se espera que de reacción positiva, manifestada por la aparición de un color café obscuro, ello se debe a que la sacarosa (sacarosa común), esta formada por dos carbohidratos, (glucosa + fluctuosa). La glucosa es una aldosa, por ello no reacciona, sin embargo, la fluctuosa es una acetosa, de aquí que el grupo cetonico reaccione con el ácido fosforico.

El tubo No.2, el cual contiene exclusivamente glucosa, permanece de color claro, ya que la glucosa es una aldosa, por lo tanto no reacciona.

4.4-Prueba de Molisch.

Numere 3 tubos de ensayo y, y proceda según el siguiente esquema.

	Tubo 1	Tubo 2	Tubo 3
Sol. Glucosa al 1%	2 ml
Sol. Fructosa al 1%		2 ml
Agua destilada			2 ml
Reactivo de Molisch	5 gotas	5 gotas	5 gotas

MEZCLAR, INCLINAR CADA TUBO Y AÑADIR CON CUIDADO A CADA TUBO H2SO4. 2ML 2 ML 2 ML

4.4 – Resultados esperados

Los tubos 1 y 2 deben dar reacción positiva. El H2SO4 permite deshidratar los carbohidratos, dando un compuesto llamado sulfural, el cual al combinarse con el alfa naftol (contenido en el reactivo de Molisch), origina un compuesto de color púrpura.

El tubo 3, no reacciona pues solo contiene agua.

4.5 Prueba de lugol para almidón y glucogeno

Numere 3 tubos de ensayo y, y proceda según el siguiente esquema.

	Tubo 1	Tubo 2	Tubo 3
Sol. Glucosa 1%	2 ml
Sol. Fructosa 1%		2 ml
Sol. Almidón 1%			2 ml
HCl concentrado	3 gotas	3 gotas	3 gotas
Lugol	1 gota	1 gota	1 gota

MEZCLAR

4.5 – Resultados Esperados

La prueba de lugol es positiva únicamente para el tubo 3, (el del almidón), ello debido a que el almidón es un polisacárido de estructura muy grande y de forma helicoidal, el yodo contenido en el lugol se introduce en la hélice de la fracción amilosa del almidón, desarrollando un color que puede ir desde el azul muy intenso o café (dependiendo de la concentración y grado de hidrólisis de la molécula). Además del almidón, el glucogeno también de reacción positiva, pues es molécula muy grande y helicoidal parecido al almidón.

Los tubos 1 y 2, contienen carbohidratos monosacáridos, son de bajo peso molecular, como no son helicoidales, no pueden fijar al yodo del lugol.

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