VITAMINAS: DETERMINACION DE LA VITAMINA C EN LA ORINA
OBJETIVO:
El alumno cuantificara loa cantidad
de ácido ascórbico (vitamina c) excretada en la orina, por el método de
Tilmans.
La vitamina c o ácido ascórbico, es una vitamina hidrosoluble, ampliamente distribuida en los vegetales verdes, y en las frutas sobre todo en las llamadas cítricos como limón, naranja, etc.). Es altamente soluble en agua, pero muy inestable. Puede formar cristales incoloros, con un punto de fusión de 190-192 °c.
La vitamina c es sintetizada por todos los animales domésticos, excepto por el cobayo. El hombre al igual que el cobayo, carece de la enzima clave para efectuar la síntesis de la vitamina, (la 1-L gunolactona oxidasa), de aquí que en la dieta que consume el hombre, deba estar presente la vitamina para evitar deficiencias.
La deficiencia de vitamina c en el hombre, produce la enfermedad conocida como escorbuto, la cual era bastante común hace algunos años (sobre todo en los marineros), cuando se desconocían las causas de esta enfermedad. El escorbuto se manifiesta por lesiones en las encías principalmente, se produce un agrietamiento de estas, debido a que la vitamina c es necesaria para la formación de colágeno.
La vitamina c aumenta la capacidad respuesta del sistema inmune de los animales.
Otras funciones que desempeña la vitamina, es la de actuar como reductor (en esta propiedad se basa el método para detectarla).
En el caso del hombre, la vitamina c como ya se mencionó, no se sintetiza, por lo tanto debe ingerirse con los alimentos que consumimos. En una dieta típica, existe mayor cantidad de vitamina que la que requerimos, y debido a que esta vitamina no puede almacenarse en el cuerpo, se elimina en la orina. La ingestión normal diaria para un adulto oscilara entre 20-80 mg/día, de los cuales un 50%se elimina en un periodo de 24 horas por la orina. En casos de deficiencia de vitamina c, o en infecciones severas, la vitamina pudiera o detectarse en orina.
FUNDAMENTO
PARA LA DETERMINACION DE VITAMINA C
El ácido ascórbico es oxidado por el colorante 2,6 diclorofenolindofenol, a su vez este
colorante es reducido por el ácido ascórbico a un compuesto incoloro, pudiendo entonces calcular la cantidad de colorante reducido, la cual es proporcional a la cantidad de vitamina c presente en la orina.
Debido a que en la orina existen otras substancias que pudieran reducir al colorante, se acidificara la orina para que, si están presentes estas substancias, reaccionan muy lentamente con el colorante.
MATERIALES REACTIVOS
2 pipetas de 10 ml Colorante 2,6
dicloro-fenolindofenol
2 pipetas 1 ml
(80 mg/100 ml)
1 vaso p.p 100 ml
1 embudo
1 agitador
1 bureta 25 ml MATERIAL
GENETICO
1 soporte para bureta
1 pinza para bureta
Orina recién evaluada
1.- Medir en una probeta el total de
orina excretada. Anotar dicho volumen.
2.- Pasar la orina a un vaso de precipitados, y añadirle una gota de ácido
acético.
3.- En otro vaso de precipitados de
100ml añadir 0.5 ml de colorante 2,6
diclofenolindofenol.
4.-Colocar la orina del paso 2 en
una bureta, y añadirla lentamente, gota a gota al vaso de precipitados que
contiene un colorante, hasta que el color desaparezca.
5.- Anotar los mililitros de orina
requeridos para reducir el colorante.
6.- Efectuar los cálculos de la
vitamina c que se haya presente en la cantidad de orina recolectada. Considere
que el colorante se haya preparado a una concentración de 80mg/1100 ml y que la
cantidad de vitamina c es directamente proporcional a la cantidad de colorante
reducido.
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