Práctica de Bioquímica para veterinaria No.7.
PROTEÍNAS: AISLAMIENTO DE LA CASEINA DE LA LECHE
El alumno aislará la proteína caseína de la leche de vaca, aprovechando el punto isoeléctrico de dicha proteína.
Las proteínas son biopolímeros de alto peso molecular, formados por la unión de aminoácidos (unidos ellos a través de un enlace llamado peptídico). Por lo general para que una molécula reciba el nombre de proteína debe tener como mínimo 50 aminoácidos y un peso mínimo de 5,000 Daltones.
Las proteínas realizan funciones muy importantes dentro del cuerpo de los animales una de ellas es la función plástica, es decir forman parte de los órganos o tejidos presentes en el cuerpo, por ejemplo los músculos contienen actina y miosina, el pelo y la piel contienen queratina, la sangre contiene hemoglobina todas estas son proteínas.
Todas las enzimas que hacen posibles las reacciones que ocurren dentro d e las células, así como los anticuerpos que defienden al organismo contra infecciones son también proteínas, de aquí se desprende que sin la presencia de las proteínas en las individuos, la vida no seria posible.
Debido a que se encuentran ampliamente distribuidas en el cuerpo y los líquidos corporales, es posible aislar las proteínas de estos últimos; para el caso de la práctica se pretende aislar la caseína, la cual esta formada por la mezcla de varias proteínas que contienen fósforo y se haya presente como componente de la leche en una cantidad de aproximadamente 35 gramos/litro.
Para separar la caseína del resto de los componentes de la leche se va a recurrir a una propiedad que tienen las proteínas de poseer un punto isoeléctrico. El punto isoeléctrico se refiere al pH en el cual las proteínas son menos solubles, en base a esa menor solubilidad la caseína puede luego precipitarse, se usará alcohol debido a la caseína es insoluble en él y además el alcohol remueve la grasa de la leche.
Gasa Amortiguador de acetato pH4.6-0.2M
Embudo Buchner Etanol 95%
Papel filtro Eter
Vaso pp 500 ml agua destilada
Vaso pp 250 ml HCl 0.1 N
Varilla vidrio NaOH 0.1 N
Potenciómetro mezcla etanol: eter (1:1)
Caja Petri leche de vaca
Probeta 100 ml
Temómetro
2 pipetas 1ml
bomba de vacío
placa de calefacción
manguera hule látex
matraz Kitasato 500 ml
1.-En un vaso de precipitados de 500 ml colocar 100 ml de leche de vaca y calentarla en la placa de calentamiento hasta que alcance los 40°C.
2.-Al mismo tiempo colocar en un vaso de precipitados 100 ml del amortiguador de acetato en la placa de calentamiento y calentar hasta que alcance los 40°C.
3.-Añadir LENTAMENTE Y AGITANDO la solución de amortiguador de acetato al vaso que contiene la leche.
4.-Medir el pH de la mezcla usando un potenciómetro, la lectura debe ser aproximadamente de 4.8, de no ser así corregir el pH añadiendo unas gotas de HCl 0.1 N para acidificar, o usar gotas de NaOH 0.1N para alcalinizar según sea el caso requerido.
5.-Enfriar la suspensión a temperatura ambiente y dejar en reposo durante 5 minutos
6.-Colocar la gasa en el embudo Buchner, y el embudo en el matraz Kitasato, el cual a su vez se conecta a la bomba de vacío.
7.-Filtrar la suspensión del paso 5 a través del embudo Buchner.
8.-Lavar el precipitado que queda en el embudo 3 veces usando 20 ml de agua cada vez
9.-Pasar el precipitado a un vaso que contenga 30 ml de etanol al 95%
10.-Colocar un papel filtro en el embudo Buchner y hacer pasar por él la suspensión del paso 9.
11.-Lavar el precipitado del embudo Buchner usando 50 ml de una mezcla de etanol-éter.
12.-Lavar el precipitado con 50 ml de éter y secar manteniendo el vacío.
13.-Remover el polvo formado y colocarlo en el fondo de una caja de Petri (LA CUAL PESO ANTES), con el fin de permitir que se evaporen los residuos de éter.
14.-Pesar la caja de Petri con la caseína y calcular el porcentaje en que se pudo recuperar la proteína.
Si trabajaron correctamente, a un pH de 4.8 que es el punto isoeléctrico que tiene la caseína, esta se precipitó pudiendo entonces ser separada del resto de los componentes que tiene la leche. Se pretende obtener un rendimiento de aproximadamente 3.5 (o un valor muy cercano a este) gramos de caseína por cada 100 ml de leche.
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