PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA
VETERINARIA No 8
ENZIMAS : HIDRÓLISIS DEL ALMIDON POR
LA AMILASA SALIVAL
OBJETIVO
El alumno demostrara la acción que
ejerce la amilasa salival sobre el almidón, demostrara la influencia del
tiempo, temperatura y pH sobre la enzima.
INFORMACION GENERAL
Las enzimas son proteínas que
efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que se produzca una
reacción determinada.
La presencia de las enzimas dentro
del cuerpo de los animales, permite que muchas reacciones puedan llevarse a
cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH con poca variación.
La amilasa es una enzima que actúa
en los procesos de digestión de carbohidratos, específicamente actúa sobre el
almidón, es una enzima glucolítica, su función es hidrolizar los enlaces
glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa de la molécula de
almidón.
La amilasa actúa desdoblando el
almidón hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan
las alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen
eritrodextrinas (llamadas así por que se tiñen de rojo si se usa lugol).
La amilasa se produce principalmente
en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo, se produce en cantidad
mucho menor en las glándulas salivales. Fuera del cerdo, el resto de los
animales domésticos, únicamente producen amilasa de origen pancreático.
En el caso del hombre, la producción
de saliva diaria puede llegar a ser de hasta 1.5 litros al día.
La acción de la amilasa se efectúa
mejor a un pH cercano a neutro.
Además de la diferencia en
concentración, esta es otra de las causas por las que la amilasa pancreática es
mas activa que la salival, ya que en el estomago el pH es muy ácido, pero a
nivel del intestino delgado es alcalino ligero.
FUNDAMENTO DE LA PRACTICA
Para estudiar la hidrólisis del
almidón (desdoblamiento), por acción de la amilasa, se aprovechara el hecho de
que el lugol (específicamente el yodo que contiene el lugol), se incorpore ala
fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a medida que la
hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo o café
claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo. Un
pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.
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MATERIALES |
REACTIVOS |
|
2 pipetas de
5 ml |
Solución de
lugol |
|
2 pipetas de
1 ml |
Saliva |
|
2 vasos p.p.
100 ml |
Sol. Almidón
al 2% |
|
2 vasos p.p.
250 ml |
HCL 0.25 N |
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6 tubos de
ensayo 13 x 100 mm |
NaOH 0.25 N |
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1 mechero |
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1 tripié |
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1 tela de
asbesto |
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1 gradilla |
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1 termómetro |
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1 embudo |
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1 trozo de
gasa |
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Cubos de
hielo |
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|
4 tiras
indicador de pH universal |
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DESARROLLO DEL EXPERIMENTO
1. Coloque un
trozo de gasa sobre el embudo y haga pasar la saliva a través de la gasa,
recibiéndola en un vaso de precipitado, cuidando que no haga espuma, complete
10 ml de saliva.
2. Prepare un baño
María a una temperatura de 40 grados centígrados
3. Rotule 4 tubos
de ensayo y proceda según el siguiente esquema:
|
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Tubo 1 |
Tubo 2 |
Tubo 3 |
Tubo 4 |
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Sol. Almidón |
2ml |
2 ml |
2 ml |
2 ml |
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Lugol |
3 gotas |
3 gotas |
3 gotas |
3 gotas |
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Sol. HCL |
1 ml |
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Sol. NaOH |
|
1 ml |
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Saliva |
1 ml |
1 ml |
1 ml |
1 ml |
4. Introduzca una
tira indicadora de pH en cada tubo y anote los valores obtenidos
5. Coloque los
tubos 1,2 y 3 en el baño María a 40 grados centígrados. El tubo 4 colóquelo en
un vaso de precipitado con hielo picado
RESULTADOS ESPERADOS
El tubo No 4 no debe de cambiar, ya
que la baja temperatura inhibe el desarrollo de la hidrólisis.
Quizá se manifieste un poco de
hidrólisis, mientras la temperatura no baja lo suficiente para inhibir a la
amilasa.
El tubo No 3, el cual no contiene ni
ácido ni álcali, y que además esta a una temperatura adecuada, es el que más
rápido cambia.
En los tubos 1 (con pH muy ácido), y
2 (con pH muy alcalino), la reacción puede inhibirse totalmente o llevarse a
cabo solo una hidrólisis inicial.
La velocidad a la que se manifiesta
la reacción de hidrólisis, es variable, depende de la concentración de la
enzima en la saliva, y esta a su vez esta muy ligada al tipo de saliva
secretada (muy acuosa o mucosa), lo cual se relaciona con el hecho de ingestión
de alimentos o ayuno antes de tomar la muestra de saliva.
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