PRACTICA DE BIOQUIMICA PARA VETERINARIA No 5

LIPIDOS: EXTRACCION DE COLESTEROL APARTIR DE CEREBRO.

OBJETIVO:

El alumno, aprovechando las propiedades de solubilidad de los lípidos en solventes orgánicos, extraerá el colesterol a partir de u7na muestra de cerebro.

IMFORMACION GENERAL

Los lípidos son una familia muy heterogenia de substancias en cuanto a su composición química; sin embargo, casi todos comparten una propiedad común, ser solubles en solventes orgánicos (éter, cloroformo, acetona etc.).

Existen 3 grupos fundamentales de lípidos:

1.- los simples: formados por la unión de un alcohol mas asido graso (grasas, aceites, ceras).

2.- los compuestos: además de alcohol y ácidos grasos, contiene en su molécula otra sustancia, por ejemplo los fosfolipidos (contiene fosforo en su molécula)

3.- los derivados: de estructura muy variable y compleja, derivan de una estructura básica repetitiva llamada unidad isoprenoide.

Ejemplo de este grupo: el colesterol.

El colesterol es un compuesto de tipo lipidito, que solo existe en los productos de origen animal (los vegetales no contienen colesterol), se halla en numerosos alimentos, pero aun cuando nos alimentemos con aquellos que no lo contengan, siempre abría colesterol en nuestro cuerpo, o en el de los animales, dado que el hígado lo produce, y otras células también, de aquí que este ampliamente difundido en muchas células del cuerpo.

El colesterol realiza constantes funciones dentro del organismo, pero su exceso puede llegar a ser perjudicial.

Puede acumularse en el interior de los vasos sanguíneos, reduciendo la luz de los mismos (arteriosclerosis).

MATERIALS REACTIVOS

Licuadora acetona

2 vasos p.p. 1000 ml alcohol etílico

1 vaso p.p. 250 ml

1 varilla de vidrio

1 embudo buchner

MATERIAL BIOLOGICO

1 matras kitasato 25 gr. De cerebro

1 bomba de basio

2 papel filtro

1 matraz balón 500 ml con brazo

Para destilación.

1 refrigerante

2 mangueras de ule latex

1 probeta 100 ml

1 mechero de buncen

1 tela de asbesto

2 soportes universal

1 pieza doble para bureta

1 aro para soporte universal

1 tubo de vidrio acodado

1 balanza granatoria.

4 trozos de gasa aprox. 15X15 cm.

DESARROLLO DEL EXPERIMENTO

Extracción de colesterol a partir de cerebro.

1.- pese 25 gr, de cerebro de res o de cerdo.

2.- colóquelos en un baso de licuadora y anadéeles 100 ml de acetona.

3.- licuar durante 1 min.

4.- pasar el licuado a un vaso de p.p. de 1000 ml.

5.- lavar el vaso de la licuadora con 15 ml de acetona y vaciar este lavado al vaso de p.p. de 1000 ml, para mezclarlo con el que tiene el paso 4.

6.- agitar por 10 minutos usando una varilla de vidrio.

7.- filtrar la suspensión a trabes e un embudo bucher, montado sobre el matraz kitasato, el cual a su ves se conecta a la bomba de vació.

8.- pasar el filtrado del martaz kitasato a un baso de precipitado de 1000 ml. CONSERVAR ESTE FILTRADO.

9.- tomar el residuo que queda en el embudo buchner, y pasarlo al vaso de la licuadora usando 50 ml de acetona.

10.- licuar durante un minuto.

11.- filtrar a través del embudo buchner tal y como hizo en el paso 7.

12.- mezclar el filtrado obtenido en el matraz kitasato con el del vaso de precipitado que contiene el filtrado del paso 8.

13.- transferir los filtrados del paso 12 a un matras balón de 1000 ml.

14.- armar el equipo de destilación (refrigerante), conectarlo con el matraz balón. (Pida ayuda de su instructor). Abrir la llave del agua.

15.- aplicar calor suave al matraz balón para eliminar la acetona por destilación.

16.-una ves destilada toda la acetona, enfriar el matraz balón en agua corriente.

17.- disolver el material del matras del balón en un volumen mínimo de alcohol caliente.

18.- filtrar aun en caliente, a través de papel filtro (colocado sobre un embudo).

19.- secar el colector al aire y anote el rendimiento en peso (considere descontar el peso del papel filtro).

5.1- resultados esperados

A pesar de que en el cerebro existen numerosos lípidos como:

Ácidos grasos, fosfatidiletanolaminas, fosfatidilserinas, fosfatidilcolinas, esfingolipidos, etcétera, estas no son soluble en acetona, por lo tanto, no son extriados del cerebro.

El colesterol si es soluble en acetona, y al usar alcohol caliente se puede cristalizar, de ai que se espere obtener en el papel filtro estos cristales de colesterol.

Para comprobar que esto es realmente colesterol, se podría aplicar posteriormente sobre el producto la prueba de lieberman-burchard (daría color verde muy intenso), a la prueba de salkowski (2 capas de color, una rojiza en la porción superior y una amarillenta en la porción anterior).

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