Práctica No.6. PROTEINA CRUDA:
Fundamento:
Las proteínas son substancias formadas por
aminoácidos, y estos a su vez son compuestos que contienen nitrógeno. Dentro de
la composición química de una proteína, aproximadamente el 16% es nitrógeno ,
este hecho se aprovecha para estimar el contenido de proteína de un
ingrediente. Se puede determinar primero su contenido de nitrógeno, y una vez
conocido este, al multiplicar la cantidad de nitrógeno obtenida por el factor 6.25, se obtiene la cantidad de
proteína cruda del producto. (6.25 resulta de dividir 100/16).
Es importante señalar que no solo las
proteínas contienen nitrógeno en su composición, ya que compuestos como los
ácidos nucleicos, la urea, diversas aminas y algunas vitaminas, también lo
contienen en cantidades variables.
El método que se utilizará para determinar la
cantidad de proteína, es el método Kjendahl. Este es un método indirecto,
realmente lo que se determina es la cantidad de nitrógeno presente en la
muestra
El análisis para determinar el contenido de
nitrógeno de la muestra consta de tres fases:
1.-Digestión u oxidación de la
materia orgánica.
2.-Destilación de la materia
orgánica para desprender el amoníaco que se condensa en una solución ácida.
3.-Titulación de esta solución
para determinar el contenido de nitrógeno.
Materiales y equipo requeridos.
Aparato
digestor-destilador de Kjeldahl.
Balanza
analítica.
Matraz
Kjeldahl de 800 ml.
Tapón
horadado No.7.
Manguera
de hule látex (2 tramos de aprox. 20 y 30 cms c/u)
Trampa
de humedad.
Matraz Erlenmeyer
de 500 ml.
2
Probetas graduada de 100 ml.
Vaso de
precipitados de 250 ml.
Soporte
Universal
Bureta
de 50 ml
Pinza
para bureta
Embudo
de vidrio
Perlas de vidrio (20).
REACTIVOS:
Acido sulfúrico concentrado.
Mezcla catalizadora (5 g.).
Solución de hidróxido de sodio al 33%. Gránulos de zinc (10).
Solución de ácido bórico al 4%.
Solución de ácido clorhídrico 0.1 N.
Solución indicadora (rojo de metilo-verde de
bromocresol).
PROCEDIMIENTO:
a) Fase de digestión.
1.-Pesar 1 gramo
de muestra (o la cantidad más aproximada) en un papel filtro.
2.-Depositar la muestra dentro del matraz
Kjendhal.
3.-Añadir 5 gms de
la mezcla catalizadora, 25 ml de ácido sulfúrico concentrado y unas 10 perlas
de vidrio.
4.-Colocar el matraz Kjendahl en una de las parrillas de la parte baja del aparato digestor, encender la resistencia y el extractor de gases, dejar oxidar la muestra hasta que tome un color azul verdoso o incoloro, (el color depende de los catlizadores usados, consulte a su instructor), habitualmente esto toma como una hora. Nota: en los primeros minutos del proceso se requiere que le de una rotación ocasional al matraz para permitir que se oxide adecuadamente la muestra.
5.- Se
apaga el digestor y se deja enfriar el matraz, cuando este frío de añaden 200
de agua destilada. Nota: -El
análisis.puede suspenderse en este punto, dejando los matraces debidamente
tapados
.
b) Fase de destilación
6.-Medir con probeta 75 ml de solución de ácido bórico y depositarla en un matraz Erlenmeyer; añadir 3-4 gotas de la solución indicadora de rojo metilo-verde bromocresol.
7.-Colocar el tubo de descarga del destilador
Kjendhal (consulte a su instructor).
8.- Colocar el matraz Erlenmeyer del paso 6
en la sección de descarga del destilador Kjendhal..Nota: debe de asegurarse que la punta del tubo de descarga quede
bajo la superficie del líquido que contiene el matraz.
9.-Colocar la trampa de humedad con el tapón
horadado a la unidad de destilación del aparato Kjendhal. Nota: Es muy importante que antes haya comprobado que
el tapón ajusta perfectamente a la boca del matraz Kjendahl, para que no vaya a
haber fugas cuando inicie la destilación.
10.-Al matraz Kjendhal (el del paso 5 ) se le
añaden 6-7 gránulos de zinc.
11.-Medir en probeta 100 ml de hidróxido de
sodio al 33%.
12.-.Inclinar el matraz Kjendhal y lentamente
y con cuidado añadir la solución de hidróxido de sodio.OJO: NO LO MEZCLE NI AGITE.
13.-Se coloca el matraz Kjendhal en la
parrilla de la sección de destilación del aparato Kjendhal, se le coloca en su
boca el tapón horadado que lleva integrada la trampa de humedad.
14.-Abrir las llaves del agua del aparato
Kjendahl para que circule y actue como refrigerante en el condensador.
15.-Encender la resistencia (aprox. En la
posición 7).
16..-Agitar el contenido del matraz Kjendahl
para mezclar.
OJO:ES MUY IMPORTANTE QUE COMPRUEBE QUE EL TAPÓN SELLA BIEN LA BOCA DEL MATRAZ, Y QUE NO HAY FUGAS DE VAPOR.
17.-Asegure el matraz Kjendhal con una pinza doble que tome el
cuello del matraz por un lado, y el tubo de refrigeración por el otro.
18.-Destilar hasta que se colecten
aproximadamente un total de 300 ml en el matraz Erlenmeyer que sirve de
receptor.
(el del paso 8).
19.-Completados los 300 ml se retira el
matraz Erlenmeyer del aparato Kjendahl
c) Fase de titulación.
20.-Colocar en una bureta de 50 ml ácido
clorhídrico 0.1 N (hasta que se llene).
21.-Colocar el matraz Erlenmeyer bajo la boca
de la bureta.
22.-Se abre la llave de la bureta y con
cuidado, gota a gota se añade la solución de ácido clorhídrico (agitando el
matraz) hasta que el indicador cambie de color.
23.-Cuando se produzca el cambio de color,
cerrar llave de la bureta y anotar con exactitud la cantidad (ml) de ácido que
se requirió para ello.
Cálculos. (&) (**)
% Nitrógeno= ml. ácido empleados Normalidad
meq del N
en
titulación X del ácido X
................... X 100
Peso de la muestra empleada
(&) Consulte con su instructor cual fue
la Normalidad del ácido usado.
(**) Se refiere al miliequivalente químico
del Nitrógeno, cuyo valor es de 0.014
Proteína cruda (%) = % Nitrógeno X 6.25
Cuestionario
1.-¿De qué depende la calidad como
nutriente de una proteína?.
2.-Explique ¿qué es y cómo se
determina el valor biológico de una proteína? .
3.-Investigue ¿qué factor en lugar
del 6.25 se emplea para otros ingredientes que se usan en alimentación animal
para estimar la cantidad de proteína a partir del porcentaje de nitrógeno?.
4.-¿Cuál es la razón de que para algunos ingredientes el factor usado para estimar la proteína a partir del porcentaje de nitrógeno no sea 6.25 sino otro?.
5.-¿Porque la determinación que usted realizó se llama también
determinación de proteína cruda o proteína bruta?.
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de Prácticas de Laboratorio de Nutrición animal I