จุดประสงค์ในการทดลองครั้งนี้เพื่อเปรียบเทียบวิธีเตรียม RNA จาก
2 วิธี และเพื่อศึกษาผลของการผสมและไม่ผสม DEPC (diethylpyrocabonate)
ซึ่งเป็นสารยับยั้งกิจกรรมของ Rnase ในสารสกัดและสารละลายที่ใช้ในการเตรียม
RNA จาก ลิ้นจี่ ลำไย และทุเรียน โดยวิธีเตรียม RNA วิธีแรกดัดแปลงจาก
Dong and Dangstan (1996) วิธีที่ 2 วิธีดัดแปลงของ Luan et al.
(1994) จากการศึกษาครั้งนี้วิธีการเตรียม RNA จากทั้ง 2 วิธีพบว่าวิธีที่
1 สามารถเตรียม RNA ได้จากพืชทั้งหมด ส่วนวิธีที่ 2 สามารถเตรียม
RNA ได้เฉพาะ ลิ้นจี่ และลำไย ในการเตรียม RNA จากทั้ง 2 วิธี สารสกัดและสารละลายที่ใช้ในการเตรียม
RNA ผ่านการผสมสาร DEPC ก่อนนำไปใช้ หลังจากนั้นเลือกวิธีเตรียม
RNA ด้วยวิธีแรกเพื่อใช้ในการศึกษาต่อไป แบ่งออกเป็น 2 วิธี โดยสารที่ใช้
เตรียม RNA ทั้งหมดจะถูกละลายในน้ำ sterile ที่ผ่านการเติม DEPC
(ชุดการเตรียม A) กับละลายในน้ำ sterile ที่ไม่ได้ผ่านการเติม DEPC
(ชุดการเตรียม B) หลังการวิเคราะห์ด้วย gel electrophoresis พบว่า
สามารถตรวจพบ RNA smear ในการเตรียม RNA เมื่อใช้การเตรียมชุด A
และไม่พบแถบ RNA จากการใช้วิธีการเตรียมชุด B ดังนั้นการเตรียม RNA
ด้วยวิธีการดัดแปลงจาก Dong and Dangstan (1996) โดยที่สารที่ใช้สกัด
RNA จำเป็นต้องผ่านการผสมสาร DEPC จึงเป็นวิธีที่เหมาะสม ต่อการนำมาเตรียม
RNA ของไม้ผลทั้ง 3 ชนิดในการทดลองนี้
|