PROGRAMMA DI INGEGNERIA GENETICA ANNO 98/99
ANALISI DEL GENOMA.
- Enzimologia dell’lngegneria Genetica: enzimi che sintetizzano Il DNA, enzimi che degradano il DNA, enzimi che modificano l'estremità 5' del DNA, enzimi che legano il DNA, endonucleasi di restrizione.
- Metodi di marcatura del DNA.
- Ibridazione.
- Mappe geniche e polimorfismi del DNA.
- Diagnosi diretta ed indiretta di malattie genetiche basata sul DNA.
- Amplificazione del DNA mediante PCR (Polymerase chain reaction) e sue applicazioni.
- Uso della PCR in diagnostica.
- Isolamento di geni mediante clonaggio molecolare.
- Tecniche di clonaggio.
- Vettori di clonaggio.
- Costruzione di genoteche di DNA genomico.
- Costruzione di genoteche di cDNA
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Metodi per la determinazione della sequenza nucleotidica del DNA.- Ripetizioni in tandem di sequenze del DNA. Geni costituiti da ripetizioni in tandem. Ripetizioni in tandem al di fuori delle regioni codificanti. Minisatelliti. DNA satellite centromerico e pericentromerico. I DNA satelliti nei bovini e nel topo. Gli
a-satelliti nei primati. Le sequenze ripetute disperse nei genomi: le sequenze SINE e le sequenze LINE. Le sequenze nei centromeri e nei telomeri.
ANALISI DELL' RNA.
- Analisi dei trascritti maturi: studio dell’organizzazione trascrizionale di un locus e misura del livello di accumulazione dell'RNA di un trascritto.
- Valutazione comparativa della velocità di trascrizione: saggio di trascrizione nucleare o di run-on , analisi di regolazione trascrizionale e posttrascrizionale.
- Analisi fine dell'organizzazione trascrizionale: S1-mapping e primer extension.
(Analisi del cDNA
- Ibridazione in situ su tessuti.
ANALISI DELL'ESPRESSIONE GENICA
- Caratterizzazione di regioni genomiche.
- Individuazione e caratterizzazione di sequenze di DNA riconosciute da proteine.
- Espressione in sistemi procariotici. Analisi dei prodotti proteici con l'uso di anticorpi monoclonali e policlonali.
- Espressione in sistemi eucariotici. Il trasferimento dei geni in cellule di mammifero. Infezione delle cellule eucariotiche in cultura.
- Trasfezione di DNA esogeno nella cellula eucariotica. Cotrasfezione con l'uso di marcatori genici selezionabili.
- Amplificazione genica per ottenere un alto livello di espressione delle proteine.
- Virus del vaiolo vaccino per la produzione di proteine ad alti livelli.
- Retrovirus come vettori altamente efficienti per il trasferimento stabile dei geni.
- Cromosomi artificiali di lievito (YAC) come vettori.
- L'impiego di lieviti nello studio della funzione dei geni eucariotici.
- Baculovirus come vettori d'espressione.
- Animali transgenici.
L'INGEGNERIA GENETICA IN MEDICINA
- Mappatura e clonaggio dei geni delle malattie umane.
- Diagnosi di malattie genetiche basata sul DNA.
- Molecole e geni del riconoscimento immunitario.
- Il progetto genoma umano.
L'INGEGNERIA GENETICA NELL'AGRICOLTURA E NELL'ALLEVAMENTO
- Resistenza genetica degli animali alle malattie.
- Metodologie innovative per la produzione di animali da allevamento transgenici.
TESTI CONSIGLIATI
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GENETIC ENGINEERING - J.G.WILLIAMS AND R.K.PATIENT. - IRL PRESS- DNA RICOMBINANTE - WATSON GILMAN WITKOWSKI ZOLLER - ZANICHELLI
- INGEGNERIA GENETICA - BONCINELLI SIMEONE - IDELSON NAPOLI
- GENI E GENOMI- Ma.xine Singer and Paul Berg - ZANICHELLI
(L’ultimo testo GENI E GENOMI è consigliato per i capitoli sulle sequenze ripetute)