|
| |
Top 
QUIKSTRIP
ONESTEP PLASMODIUM FALCIPARUM
MALARIA TEST
ชุดตรวจหาการติดเชื้อมาลาเรียชนิด
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม
จากเลือดปลายนิ้ว
อาศัยหลักการอิมมูโนแอสเสย์
มีความจำเพาะต่อเชื้อสูง
ขั้นตอนทดสอบง่าย
INTRODUCTION
ULTIMED Quikstrip P.falciparum malaria test เป็นชุดทดสอบคัดกรองแบบ
ขั้นตอนเดียว อาศัยหลักการ two site sandwich immunoassay เพื่อตรวจหา
P.falciparum specific histidine rich protein-2 (Pf HRP-2) จากตัวอย่าง
เลือด
ทั้งเลือดจากปลายนิ้ว / เลือดจาก
EDTA / เลือดจาก HEPARIN
SUMMARY
มาลาเรียจัดเป็นพาราไซต์ที่เป็นปัญหาสำคัญตัวหนึ่งของโลกเขตร้อน
สามารถทำ
ให้ถึงกับเสียชีวิตได้เป็นลำดับต้นๆรองจากวัณโรค
ประมาณว่าเกือบ 40% ของ
ประชากรโลกอาศัยอยู่ในแหล่งระบาดของเชื้อมาลาเรีย
การติดต่อที่สำคัญมาสู่คน
มาจากยุงโดยเฉพาะยุงก้นปล่องที่เป็นพาหะมากัดคนในขณะดูดเลือดและปล่อย
เชื้อมาลาเรียเข้ามาสู่คน
ประกอบกับการขนส่งเดินทางที่สดวกรวดเร็วในปัจจุบัน
เป็นตัวการสำคัญที่ช่วยกระจายโรคมาลาเรียนี้ออกไปสู่พื้นที่อื่นที่ไม่ได้เป็นแหล่ง
ระบาดได้อย่างมากในปัจจุบัน
เชื้อมาลาเรียที่เป็นสาเหตุสำคัญที่ทำให้เกิดโรคในมนุษย์มี
4 สายพันธุ์คือ
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม /
พลาสโมเดียม ไวแว็ก / พลาสโมเดียม
โอวาเล่ และ
พลาสโมเดียม มาลาเลอี
แต่ตัวที่เป็นปัญหาสำคัญได้แก่
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม (P.falciparum)
เนื่องจากมีความรุนแรงและสามารถ
ทำให้เสียชีวิตได้มากกว่าสายพันธุ ์ อื่นๆ
พลาสโมเดียม ไวแว็ก (P.vivax)
เป็นชนิดที่พบได้บ่อยแต่มีความรุนแรงของ
อาการน้อยกว่าแบบแรก
พลาสโมเดียม มาลาเลอี (P.malariae)
เป็นชนิดที่พบได้ในพื้นที่เฉพาะแถบ
อัฟริกา อเมริกาใต้ และ แถบนิว
กินี
พลาสโมเดียม โอวาเล่ (P.ovale )
เป็นชนิดที่พบได้ในพื้นที่เฉพาะแถบทรอปิคอล
อัฟริกา
เนื่องจากอาการและความรุนแรงของเชื้อมาลาเรียชนิด
P.falciparum การตรวจ
พบและแยกชนิดได้เร็วมากเท่าไรผู้ป่วยก็จะมีความปลอดภัยและลดโอกาสเสีย
ชีวิตได้มากขึ้น
เนื่องจากเชื้อชนิด P.falciparum
สามารถทำให้เกิดเชื้อมาลาเรีย
ขึ้นสมองได้
และยังเป็นชนิดที่ดื้อยาและทนต่อยาได้มากกว่าชนิดอื่นๆ
จึงเป็น
ความจำเป็นที่ต้องรีบแยกชนิดและตรวจหาการติดเชื้อให้ได้เร็วที่สุด
เพื่อการดูแล
รักษาให้ตรงกับชนิดให้มากที่สุด
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม
ฮีสติดีน ริช โปรตีน-2 (Pf HRP-2)
เป็นโปรตีนชนิดที่
ละลายน้ำได้
เป็นโปรตีนที่ขับออกมาจากเม็ดเลือดแดงที่มีเชื้อมาลาเรียอาศัยอยู่
ซึ่งจัดเป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญในการใช้ตรวจหาตัวเชื้อมาลาเรียชนิดฟัลซิฟารั่ม
ชุดทดสอบ ULTIMED
แบบขั้นตอนเดียวในการตรวจเชื้อมาลาเรียฟัลซิฟารั่ม
เป็น
การตรวจหา Pf. HRP-2 ในตัวอย่างเลือด
ชึ่งมีความแม่นยำและจำเพาะต่อเชื้อ
มาลาเรียชนิด ฟัลซิฟารั่ม สูง
Pf HRP-2
เป็นสารที่อยู่ในร่างกายได้หลายวันถึงแม้การรักษาสำเร็จอย่างสมบูรณ์
แล้ว
ดังนั้นการจะใช้ทดสอบเพื่อตามผลการรักษาควรจะทำการทดสอบภายหลัง
15 วันหลังจบการรักษาแล้ว
จึงจะใช้ช่วยยืนยันการรักษาได้
ความไวของชุดทด
สอบเมื่อเปรียบเทียบกับจำนวนเชื้อในตัวอย่างเลือดได้ดังนี้
| จำนวนเชื้อ 100
ตัว/ไมโครลิตรเลือด = 100% sensitivity |
| จำนวนเชื้อ 50
ตัว/ไมโครลิตรเลือด = 70% sensitivity |
| จำนวนเชื้อ 10
ตัว/ไมโครลิตรเลือด = 50% sensitivity |
PRINCIPLE
ULTIMED Quikstrip P.falciparum malaria test
เป็นชุดทดสอบแบบขั้นตอน
เดียว
ไม่ต้องอาศัยความชำนาญในการตรวจแยกชนิดของเชื้อ
มีความจำเพาะสูง ในการ
แยกชนิดเชื้อของ P.falciparum malaria
อาศัยหลักการของ CICA technique
(Color ImmunoChromatographic Assay)
โดยการใช้บัปเฟอร์เป็น
ตัวพาให้เลือดเคลื่อนตัวผ่านไปบนแผ่นเมมเบรนของแถบตรวจ
เมื่อเคลื่อนตัวมา
ถึงบริเวณน้ำยาที่เคลือบอยู่ (anti Pf
HRP-2 antisera~colloidal gold conjugate (monoclonal)
complexes)
ในกรณีที่ตัวอย่างเลือดมีเชื้อมาลาเรียอยู่
Pf HRP-2
ที่เกิดจากเชื้อ P.falciparum
จะเกิดการจับตัวกันเป็นคอมเพล็ก
และเมื่อเคลื่อน
มายังบริเวณทดสอบ
ส่วนคอมเพล็กจะถูกจับติดอยู่กับส่วน
test band โดย immobolised
anti Pf HRP-2 (monoclonal) antisera
ทำให้เกิดเป็นแถบสีม่วง
ให้เห็น
แสดงว่าตัวอย่างมีการติดเชื้อ
พลาสโมเดียม ฟัลซิฟารั่ม
สำหรับส่วนของ anti Pf HRP-2 antisera~colloidal gold conjugate
(monoclonal) อิสระ
ที่ไม่ได้จับกับ Pf HRP-2
ก็จะเคลื่อนตัวผ่านเส้นทดสอบต่อไปและจะ
ไปถูกจับให้ติดอยู่กับส่วน control band
ด้วย immobilized by anti mouse antibodies
ทำให้เกิดเป็นแถบสีม่วงเส้นที่สองขึ้นซึ่งใช้เป็นตัวชี้ว่าน้ำยายังทำงาน
ตามปกติอยู่
REAGENTS AND MATERIAL SUPPLIED
ในชุดทดสอบประกอบด้วย :
1. Individually pouched dipsticks :
แถบตรวจในซองฟลอย์พร้อมสารป้องกันความชื้น
2. Clearing buffer :
น้ำยาบัปเฟอร์สำหรับทดสอบในขวดหยด
3. Sample application pipettes.
หลอดหยดตัวอย่างทดสอบ
4. Package insert คู่มือทำการทดสอบ
STORAGE AND STABILITY
ชุดทดสอบควรเก็บที่อุณหภูมิ 4 - 30
องศาเซลเซียส
ในระหว่างรอการใช้งาน จะมี
อายุตรงกับที่กล่องระบุ
ไม่ควรแช่แข็ง
หลีกเลี่ยงความร้อนและแสงแดดจัด
อาจทำ
ให้น้ำยาเสื่อมเร็วกว่ากำหนดได้
ข้อควรระวัง
-
อ่านคู่มือการทดสอบให้เข้าใจก่อนเริ่มทำการทดสอบ
-
เป็นการทดสอบภายนอกร่างกายเท่านั้น
( in vitro diagnostic use only )
-
ไม่ควรนำชุดที่หมดอายุแล้วมาทำการทดสอบ
-
ไม่ควรนำชุดทดสอบและน้ำยาบัปเฟอร์คนละ
Lot มาใช้ร่วมกัน
- ระมัดระวังตัวอย่างทดสอบ
ตามมาตรฐานความปลอดภัยการติดเชื้อ
การเก็บตัวอย่างทดสอบ
- ตัวอย่างเลือดที่ใหม่
ในสารป้องกันการแข็งตัวของเลือด
เช่น EDTA / Heparin / Oxalate
-
ตัวอย่างเลือดที่เจาะจากปลายนิ้ว
-
เลือดที่ไม่สามารถทดสอบได้ทันที
สามารถเก็บแช่เย็นที่ 2-8
องศาได้นาน 3 วัน
- Clotted Blood เลือดที่แข็งตัวแล้ว
ไม่เหมาะสมในการนำมาทำการทดสอบ
การทำการทดสอบ
1.
นำชุดทดสอบมารอไว้ให้ได้ตามอุณหภูมิห้องก่อนนำมาใช้ทดสอบ
2.
ดึงแถบตรวจมาวางรอไว้บนพื้นราบที่เรียบและสะอาด
3. นำตัวอย่างเลือดจำนวน 5 ul.
มาหยดลงในพื้นที่ส่วนล่างของลูกศร
4. หยดน้ำยาบัปเฟอร์จำนวน 4
หยดลงในภาชนะที่สะอาด / หลอดทดสอบ
5.
จุ่มแถบตรวจที่หยดตัวอย่างเลือดแล้วลงไปในบัปเฟอร์
โดยให้ด้านลูกศรลงไปในบัปเฟอร์ก่อน
6. รออ่านผลการทดสอบที่ 10 นาที
ไม่ควรอ่านผลนานเกินกว่า 15 นาที
การแปลผลการตรวจ
NEGATIVE ตรวจไม่พบเชื้อ P.falciparum
ในตัวอย่างเลือด
จะปรากฏแถบสีม่วงเพียง 1 แถบ
POSITIVE ตรวจพบเชื้อ P.falciparum
ในตัวอย่างเลือด
จะปรากฏแถบสีม่วงจำนวน 2 แถบ
INVALID ไม่ปรากฏแถบสีใดๆเลย
ให้อ่าน/ตรวจสอบขั้นตอน
เริ่มทดสอบใหม่
ข้อจำกัดของการทดสอบ
1. สารโปรตีน Pf HRP-2
ที่ขับออกมาจากเชื้อมาลาเรีย Pf
จะอยู่ได้ในเลือดได้นาน
หลายวัน
ถึงแม้จะรักษาได้ผลดีแล้วก็ตาม
ดังนั้นการใช้ชุดทดสอบเพื่อติดตาม
ผลการรักษา
ควรตรวจภายหลังการรักษาไปแล้ว 2
อาทิตย์ถ้าไม่ปรากฏ 2 แถบ
แสดงว่าการรักษาได้ผลเรียบร้อย
2.
ถึงแม้จะเป็นชุดที่มีความไวและความจำเพาะสูง
แต่ก็ควรใช้ประกอบกับอาการ
อื่นๆร่วมด้วย
BIBLIOGRAPHY
1. Howard, R.J., et al, 1986 : Secretion of a Malarial Histidine-rich Protein
(Pf HRP-2) from Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes. J. Cell
Biol.., 103, 1269-1277.
2. Rock, E.P., et al, 1987 : Comparative Analysis of the Plasmodium
falciparum Histidine-Rich Proteins HRP-I, HRP-II, and HRP-III in Malaria
Parasities of Diverse Origin. Parasitol., 95, 209-227.
3. Parra, M.E., et al, 1991 : Identification of Plasmodium falciparum
Histidine-Rich Protein-2 in the Plasma of Humans with Malaria. J. Clin.
Microbiol., 29, 1629-1634
4. Rodriguez-Del valle, M., et al 1991 : Detection of Antigens and
Antibodies in the Urine of Humans with Plasmodium falciparum Malaria.
J. Clin. Microbiol, 29, 1236-1242.
5. Data on file, Orchid Biomedical Systems.
6. Shiff C.J., Premji Z., Minjas J.N., The rapid manual ParaSight-F test. A
new diagnostic tool for Plasmodium falciparum infection, Trans R Sec
Trop Med Hyg 1993 Nov-Dec 87 : 6 646-8
7. Beadle C., Long G.W., McElroy P.D., Maret S.M., Oloo A.J., Hoffman
S.L., Diagnostic of malaria by detection of Plasmodium falciparum
HRP-2 antigen with a rapid dipstick antigen-capture assay, Lancet
1994 Mar 5 343:8897 564-8
ThaiL@bOnline - Crystal Diagnostics
Email : vichai-cd@usa.net
Phone : (02) 803-7310-11 Fax. : (02) 803-6705 ext 0
|
