ENZIMOLOGIA

 

PROPRIETA' DEGLI ENZIMI

Nomenclatura e CLASSIFICAZIONE I.U.P.A.C. DEGLI ENZIMI;

Tecniche cromatografiche ed elettroforetiche applicate all'isolamento e allo studio delle proteine.

Distribuzione subcellurare e submitocondriale di enzimi. Concetto di enzimi marker.

Applicazione di queste tecniche e strategie all'individuazione di enzimi nei mitocondri

(pubblicazione in inglese tratta da giornali specifici).

CINETICA ENZIMATICA

1. ipotesi equilibrio rapido (Henry, Michaelis, Menten);

2. ipotesi equilibrio dinamico (Briggs, Haldane);

3. definizione parametri cinetici Km e Vmax;

4. determinazione di Km e Max mediante:

· metodo grafico e matematico;

· metodo dei doppi reciproci;

· metodo di Eadie-Hofstee.

REAZIONI A PIU' SUBSTRATI (nomenclatura secondo Cleeland).

MECCANISMO REAZIONI BIBI:

· meccanismo a ping-pong;

· meccanismo sequenziale random;

· meccanismo sequenziale ordinato.

INIBIZIONE: REVERSIBILE E IRREVERSIBILE TOTALI E PARZIALI

INIBIZIONE REVERSIBILI: COMPETITIVE; ACOMPETITIVE; NON COMPETITIVE;

INIBIZIONE DA SUBSTRATO;

INIBIZIONE DA PRODOTTO;

INIBITORI DEAD-END;

STUDIO INIBIZIONE MEDIANTE METODI GRAFICI:

· metodo dei doppi reciproci;

· metodo di Eadie-Hofstee;

· grafico di Dixon;

· inibizione frazionaria.

Uso DEGLI INIBITORI PER DETERMINARE L'ORDINE DI ENTRATA DEI SUBSTRATI E

MECCANISMO DI REAZIONE.

 

ENZIMI ALLOSTERICI.

MODELLO A SIMMETRIA CONCERTATA DI MONOD; MODELLO A INTERAZIONE SEQUENZIALE; ALTRI MODELLI:

· MECCANISMO DI CONTROLLO SEQUENZIALE;

· MOLTEPLICITA' ENZIMATICA;

RETRO-INIBIZIONE CONCERTATA: COOPERATIVA E CUMULATIVA.

REGOLAZIONE ENZIMATICA DELLE VIE METABOLICHE

· SINTESI, TRASPORTO INTRACELLULARE, MODIFICAZIONI POST-TRADUZIONALI (es. FLAVINILAZIONE) E DI ENZIMI (NUOVE PROTEINE COINVOLTE IN QUESTI PROCESSI es. I CHAPERON MOLECOLARI ED I PROTEASOMI)

MODIFICAZIONE ATTIVITA':

· covalente reversibile e irreversibile;

· non covalente.

REGOLAZIONE DA PARTE DEL SUBSTRATO;

REGOLAZIONE DA PARTE DEI PARAMETRI CINETICI.

la catalisi enzimatica

ENZIMOLOGIA ANALITICA E SUE APPLICAZIONI

DOSAGGIO ENZIMATICO (DIRETTO E INDIRETTO):

· Dì ATTIVITA'ENZIMATICA E DI SUBSTRATO;

· DOSAGGIO DEL SUBSTRATO CATALITICO (A CASCATA O PER ATTIVAZIONE ENZIMATICA)

· DOSAGGIO DEL SUBSTRATO A "ENDED POINT";

· DOSAGGIO DEL SUBSTRATO A "FIXED POINT"

DOSAGGIO ATP:

· GLUCOSIO 6 FOSFATO DEIDROGENASI;

· IN BIOLUMINESCENZA.

TRASLOCASI: studi di cinetica di saturazione, decorso temporale, inibizioni, dipendenza dal pH e dalla temperatura.

Determinazione dello stadio lento

ESERCITAZIONE IN LABORATORIO: DETERMINAZIONE DEI PARAMETRI CINETICI DELL' ENZIMA GLUTAMMATO DEIDROGENASI PER IL SUBSTRATO CHETOGLUTARATO.

 

ARTICOLI

"RAT LIVER MITOCHONDRIA CAN SYNTETIZE NICOTINAMIDE ADENINE DINUCLEOTIDE FROM NICOTINAMIDE MONONUCLEOTIDE AND ATP VIA A PUTATIVE MATRIX NICOTINAMIDE MONONUCLEOTIDE ADENYL TRANSFERASE" (Bioch. and Mol. Biol. Inter. VoL. 38 N. 2 Feb. 1996).

"NAD BIOSYNTHESIS IN HUMAN PLACENTA: PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF HOMOGENEOUS NMN ADENYLYL TRANSFERASE"(Archivies of Biochemestry and Biophysies Vol. 298 N. 1 Oct. 1992).

 

INIBITION OF NUCLEO SIDE DIPHOSPHATE KINASE IN RAT LIVER MITOCHONDRIA BY ADDED AZT

· MITOCHONDRIA AS CELL TARGETS OF AZT.

· MECHANISM OF TOXICITY OF AZT; ITS INTERACTION WITH ADENILATE KINASE. AZT UPTAKE INTO ISOLATED RAT LIVER MITOCHONDRIA AND IMPAIRMENT OF ADP/ATP TRANSLOCATOR

 

LAVORI SULLA FLAVINILAZIONE E BIOGENESI IN RL D I AAT.

LAVORI SUL TRASPORTO PROTEINE (MARRA ECC)