GERA-BRASIL: Grupo de Estudo em Reprodução Animal do Brasil

G.E.R.A. Brasil

Grupo de Estudo em Reprodução Animal do Brasil

		G.E.R.A. Brasil Grupo de Estudo em Reprodução Animal do Brasil

RESUMO
Efeito do DNA mitocondrial (mtDNA) na Interação Núcleo-Citoplasmática de Embriões Murinos Reconstituídos por Transferência de Citoplasto

Yamazaki, W.¹; Meirelles, F.V.,²; Bordignon, V.³; Garcia, J.M.¹; Smith, L.C.³

¹ Dep. de Med. Vet. Preventiva e Reprodução Animal, FCAV/UNESP, Jaboticabal-SP, Brasil. ² Dep.de Ciências Básicas, FZEA/USP, Pirassununga-SP, Brasil. ³ Centre de Recherche en Reproduction Animale (CRRA),FMV, Université de Montréal, Québec, Canadá.

Arq. Fac. Vet. UFRGS, Porto Alegre, v.27, n.1, p.310, (1999) (Supl.)

RESUMO:
O desenvolvimento de embriões reconstituídos pode ser comprometido por incompatibilidades na interação núcleo-citoplasmática. . O objetivo deste estudo foi de avaliar o efeito epigenético da transferência de citoplastos contendo DNA mitocondrial (mtDNA) de linhagem New Zealand Black (NZB/BINJ) em zigoto recipiente de linhagem (C57BL/6) no desenvolvimento embrionário em murinos (Mus musculus domesticus).Os citoplastos foram obtidos de oócitos ativados de 7 grupos distintos, contendo mesmo mtDNA (100% de origem NZB/BINJ) mas diferente genoma nuclear (nDNA): grupo 1 (G1) (100%NZB/BINJ), G2 (50 %NZB/BINJ e 50%129), G3 (25%NZB/BINJ e 75%129), G4 (12,5%NZB/BINJ e 82,5%129), G5 (0,2%NZB/BINJ e 99,8%C57BL/6), G6 (0,1%NZB/BINJ, 49,9%C57BL/6 e 50%129), G7 (0,01%NZB/BINJ, 24,99%C57BL/6 e 75%129), e grupo controle manipulado, com nDNA e mtDNA 100% de origem C57BL/6. Zigotos e oócitos ativados (etanol a 7% por 5 min) eram colocados em meio CZB contendo inibidores do citoesqueleto para microcirurgia (10mg citocalasina D ml-1 e 0,03mg nocodazole ml-1). A microcirurgia era realizada retirando-se o 2o corpúsculo polar do zigoto recipiente (C57BL/6) e transferindo-se o citoplasto (aproximadamente 15% do citoplasma do oócito ativado) para o espaço perivitelíneo. Após microcirurgia, o citoplasto era fundido com o zigoto recipiente por eletrofusão em solução de manitol a 0.3 M utilizando-se um pulso de 1 kV cm-1 por 70ms. Zigotos reconstituídos com êxito e do grupo controle não manipulado eram cultivados em meio CZB à 37,5oC e atmosfera umidificada de 5% de CO2 por 3,5 dias, quando eram avaliados quanto ao desenvolvimento embrionário. A taxa de desenvolvimento a blastocisto foi de 72,97% (54/74) no G1, 73,49% (61/83) no G2, 73,04% (84/115) no G3, 74,68% (59/79) no G4, 76,06% (54/71) no G5, 78,05% (64/82) no G6, 76,14% (67/88) no G7, , 82,42% (75/91) no grupo controle manipulado e 86,30% (296/343) no grupo controle não manipulado. Não houve diferença significativa (p<0,05) na taxa de desenvolvimento a blastocisto dos zigotos reconstituídos entre os grupos doadores de citoplastos contendo mtDNA de origem NZB/BINJ, assim como entre os grupos controles manipulado e não-manipulado com mtDNA de origem C57BL/6. Entretanto, com exceção do G6, a taxa de desenvolvimento a blastocisto nos grupos de citoplastos transferidos contendo mtDNA de origem NZB/BINJ foi menor (p<0,05) que nos grupos controles de mtDNA de origem C57BL/6. Estes resultados demonstram que a taxa de desenvolvimento a blastocisto de zigotos reconstituídos C57BL/6 pela transferência de citoplasto com mitocôndrias contendo mtDNA de origem NZB/BINJ pode ser diminuída, indicando haver efeito do mtDNA na interação núcleo-citoplasmática responsável pelo desenvolvimento embrionário.

palavras-chaves: transferência de citoplasto, DNA mitocondrial, desenvolvimento embrionário

**RESUMO**
Efeito do DNA mitocondrial (mtDNA) na Interação Núcleo-Citoplasmática de Embriões Murinos Reconstituídos por Transferência de Citoplasto
Yamazaki, W.¹; Meirelles, F.V.,²; Bordignon, V.³; Garcia, J.M.¹; Smith, L.C.³
¹ Dep. de Med. Vet. Preventiva e Reprodução Animal, FCAV/UNESP, Jaboticabal-SP, Brasil. ² Dep.de Ciências Básicas, FZEA/USP, Pirassununga-SP, Brasil. ³ Centre de Recherche en Reproduction Animale (CRRA),FMV, Université de Montréal, Québec, Canadá.
Arq. Fac. Vet. UFRGS, Porto Alegre, v.27, n.1, p.310, (1999) (Supl.)
RESUMO: O desenvolvimento de embriões reconstituídos pode ser comprometido por incompatibilidades na interação núcleo-citoplasmática. . O objetivo deste estudo foi de avaliar o efeito epigenético da transferência de citoplastos contendo DNA mitocondrial (mtDNA) de linhagem New Zealand Black (NZB/BINJ) em zigoto recipiente de linhagem (C57BL/6) no desenvolvimento embrionário em murinos (Mus musculus domesticus).Os citoplastos foram obtidos de oócitos ativados de 7 grupos distintos, contendo mesmo mtDNA (100% de origem NZB/BINJ) mas diferente genoma nuclear (nDNA): grupo 1 (G1) (100%NZB/BINJ), G2 (50 %NZB/BINJ e 50%129), G3 (25%NZB/BINJ e 75%129), G4 (12,5%NZB/BINJ e 82,5%129), G5 (0,2%NZB/BINJ e 99,8%C57BL/6), G6 (0,1%NZB/BINJ, 49,9%C57BL/6 e 50%129), G7 (0,01%NZB/BINJ, 24,99%C57BL/6 e 75%129), e grupo controle manipulado, com nDNA e mtDNA 100% de origem C57BL/6. Zigotos e oócitos ativados (etanol a 7% por 5 min) eram colocados em meio CZB contendo inibidores do citoesqueleto para microcirurgia (10mg citocalasina D ml-1 e 0,03mg nocodazole ml-1). A microcirurgia era realizada retirando-se o 2o corpúsculo polar do zigoto recipiente (C57BL/6) e transferindo-se o citoplasto (aproximadamente 15% do citoplasma do oócito ativado) para o espaço perivitelíneo. Após microcirurgia, o citoplasto era fundido com o zigoto recipiente por eletrofusão em solução de manitol a 0.3 M utilizando-se um pulso de 1 kV cm-1 por 70ms. Zigotos reconstituídos com êxito e do grupo controle não manipulado eram cultivados em meio CZB à 37,5oC e atmosfera umidificada de 5% de CO2 por 3,5 dias, quando eram avaliados quanto ao desenvolvimento embrionário. A taxa de desenvolvimento a blastocisto foi de 72,97% (54/74) no G1, 73,49% (61/83) no G2, 73,04% (84/115) no G3, 74,68% (59/79) no G4, 76,06% (54/71) no G5, 78,05% (64/82) no G6, 76,14% (67/88) no G7, , 82,42% (75/91) no grupo controle manipulado e 86,30% (296/343) no grupo controle não manipulado. Não houve diferença significativa (p<0,05) na taxa de desenvolvimento a blastocisto dos zigotos reconstituídos entre os grupos doadores de citoplastos contendo mtDNA de origem NZB/BINJ, assim como entre os grupos controles manipulado e não-manipulado com mtDNA de origem C57BL/6. Entretanto, com exceção do G6, a taxa de desenvolvimento a blastocisto nos grupos de citoplastos transferidos contendo mtDNA de origem NZB/BINJ foi menor (p<0,05) que nos grupos controles de mtDNA de origem C57BL/6. Estes resultados demonstram que a taxa de desenvolvimento a blastocisto de zigotos reconstituídos C57BL/6 pela transferência de citoplasto com mitocôndrias contendo mtDNA de origem NZB/BINJ pode ser diminuída, indicando haver efeito do mtDNA na interação núcleo-citoplasmática responsável pelo desenvolvimento embrionário.
palavras-chaves: transferência de citoplasto, DNA mitocondrial, desenvolvimento embrionário

Se você ainda não é cadastrado, mudou de e-mail ou algum dos dados não está correto, por favor, entre em contato conosco! Nosso e-mail é: reproduction@bol.com.br

Cique aqui para você se cadastrar!

CADASTRE-SE JÁ!

Retornar a Listagem de Membros