세 균 염 색

Ⅰ. Gram's staining

1. 염색성분

1) SOLUTION

(1) Ammonium oxalate crystal violet

Solution Ａ

- Crystal violet (90% dye content) 2g

- Ethyl-alcohol (95%) 20ml

Solution Ｂ

- Ammonium oxalate 0.8g

- D . W 80ml

Ａ sol. + Ｂ sol. 1-7일간 방치 Filter paper

(2) Gram's iodine (Lugal's solution)

Iodine crystal 1g

Potassium iodine 2g

D . W 300ml

(3) Decolorizer (탈색액) (1:1)

Ethyl-alcohol (95%) + Aceton

(4) Counter stain (대조염색)

Safranin O 2.5g

Ethyl-alcohol 100ml에 녹인후

D . W 900ml에 첨가

2. 염색과정

1) Slide glass에 얇게 도말한다. (딴 colony에 증류수로 섞어 도말)

2) 가열하여 고정시킨다.

3) Crystal violet에 1분간 염색

4) 흐르는 물에 씻는다. (Slide glass 뒷면에)

5) Gram's iodine에 1분간 작용

6) 수도물에 씻는다.

7) Aceton, Alcohol에 탈색 (4초간)

8) Safranin으로 30초간 염색

9) 수도물에 간접 염색

10) 건조후 검경

Ｇ + ------------→ 보라색

Ｇ - ------------→ 적색

Ⅱ. 단 염색 (Simple staining)

1) Methylene blue : 1% methylene blue Alcohol solution 5ml와

95ml D.W에 혼합시킨다.

2) Crystal violet : 1000ml D.W에 0.1-1.0%가 되도록 Crystal violet를 녹인다.

☞ 단 염색은 smear → drying → fixation → staining → washing → drying → 검경

Ⅲ. 생체 염색법 (Vital staining)

- Crystal violet (0.1% solution) 또는 Methylene blue (0.02% solution) 으로 배양액과

염색액을 1:1로 희석하여 Slide glass에 놓고 cover glass로 덮어 검경한다.