Introducción

Los ensayos descritos a continuación son adecuados para efectuar pruebas cualitativas (ColiBagMR) o cuantitativas (ColiPlateMR y ColiStripMR) de la calidad microbiológica del agua. Los kits contienen medios selectivos para estimular el crecimiento de bacterias coliformes totales y Escherichia coli, así como substratos cromogénicos/fluorogénicos. Estos substratos reaccionan con enzimas específicas de coliformes totales (beta-D-galactosidasa) formando un color distintivo azul verdoso (técnica X-Gal) y E. coli (beta-D-glucuronidasa) formando una sustancia fluorescente (técnica MUG). Estas reacciones de color permiten analizar, sin problema, aguas turbias, de color café o con óxido. Existen varias pruebas confirmatorias si hay duda de los resultados.

Ventajas de los kits

1. No es necesario preparar medios de cultivo, reactivos, ni invertir tiempo en esterilizarlos.
2. Los resultados se obtienen en poco tiempo (hasta 48 horas), dependiendo de la densidad de bacterias en la muestra y de la temperatura de incubación. La temperatura óptima de incubación es 36 + 1ºC.
3. Por su forma y tamaño, ocupan menos espacio en la incubadora que métodos convencionales, maximizándose el uso de la misma.
4. Pueden ser usados por personas sin mayor entrenamiento ni conocimientos técnicos.
5. Son estables hasta por 1 año en almacenamiento en un lugar fresco y seco, pero por mucho más tiempo en refrigeración.

ColiBag™

El kit de ColiBagMR es una buena herramienta de tamizaje para detectar contaminación fecal del agua. El kit está diseñado para satisfacer objetivos reguladores para agua potable. El ensayo es fácil de realizar, fácil de interpretar, no requiere preparación ni de personal especializado de laboratorio. La toma de muestra, incubación y observación se hacen en la misma bolsa.

El kit se presenta como una bolsa plástica pre-esterilizada que contiene nutrientes y reactivos para detectar la presencia o ausencia de bacterias coliformes y E. coli, principalmente en agua potable (clorada o no clorada). Su sensibilidad es de una (1) Unidad Formadora de Colonia (UFC) en 100 mililitros de agua.

Procedimiento

Rasgue la banda perforada y abra la bolsa halando las pestañas blancas. Llene la bolsa con agua hasta la línea de llenado (100 ml). No toque el interior de la bolsa. Si va a ser transportada a un laboratorio, hacerlo en frío y total oscuridad.

Remueva el exceso de aire y enrolle la bolsa cuatro o cinco veces alrededor de la banda de alambre. Doble los alambres para sellarla.

Remueva el clip divisorio. Mezcle el polvo con el agua hasta que se disuelva completamente (10 a 30 segundos).

4.Incubar en total oscuridad a 36 + 1ºC por 24 horas (agua no tratada) o hasta 48 horas (para agua clorada).

InterpretaciónObserve el color:

	< Amarillo: coliformes y E. coli ausentes
Azul verdoso: coliformes presentes>
	Observe bajo una luz ultravioleta (de onda larga, 350-366 nm): No fluorescencia: E. coli ausente Fluorescencia azul: E. coli presente
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ColiPlate™

El kit ColiPlateMR es una prueba conveniente para cuantificar la densidad de bacterias coliformes totales y E. coli. La prueba está diseñada para satisfacer lineamientos regulatorios para agua superficial, agua recreacional, aguas de proceso y aguas servidas. Se ha usado también para determinaciones en agua potable.

Se presenta como una microplaca plástica pre-esterilizada de 96 pozos, que contiene nutrientes y reactivos para la determinación cuantitativa (por el método del Número Más Probable, o NMP de Unidades Formadoras de Colonia, o UFC) de bacterias coliformes totales y E. coli. Su rango de detección es de 3 a 2400 UFC en 100 mililitros de agua, sin necesidad de diluir la muestra.

Esta prueba correlaciona muy bien con las técnicas de fermentación en tubos múltiples (FTM) y de filtración por membrana (FM). La técnica de ColiPlateTM presenta, además, varias ventajas sobre la técnica de FM.

Procedimiento

Vierta la muestra de agua (20 a 30 ml) en la tapadera de la microplaca.

Llene totalmente o dispense 400 µl a cada pozo de la microplaca, usando una pipeta automática (mono- o multicanal), una pipeta sencilla u otro instrumento descartable estéril o desinfectado.

Descarte el agua sobrante de la tapadera y utilícela para cubrir la microplaca. Introduzca la microplaca en la bolsa en la que viene envuelta e incube por 24 horas.

INTERPRETACION

1.Cuente el número de pozos que se tornaron azul verdoso. Refiérase al cuadro de NMP adjunto para determinar el NMP de UFC de coliformes totales en 100 ml de muestra.

2. Observe bajo una luz ultravioleta y cuente el número de pozos que presentan fluorescencia (azul). Refiérase al cuadro de NMP adjunto para determinar el NMP de UFC de E. coli en 100 ml de muestra.

Cuadro de NMP para ColiPlate^MR

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Su principio es el mismo que el de ColiPlateMR, sólo que se presenta como una microplaca plástica pre-esterilizada de 16 pozos y su rango de detección es de 16 a 900 UFC en 100 mililitros de agua. Para tomar la muestra, la placa se sumerge directamente en el cuerpo de agua o recipiente con la muestra, o se puede llenar usando una pipeta. Los pozos tienen una capacidad de 400 µl. Los resultados se interpretan según el cuadro de NMP adjunto.

Cuadro de NMP para ColiStripMR

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