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BACTERIAS
Aunque existen miles de especies de bacterias diferentes, los organismos individuales presentan una de las tres formas generales siguientes:
- esférica
- en forma de bastón
- espiral
Las bacterias esféricas se denominan COCOS. Muchas bacterias con esta forma presentan modelos de agrupación que derivan de los diversos planos de división celular. Así tenemos:
* cocos en pares
(diplococos)----------- Ej. Neisseria Las células bacterianas cilíndricas
se denominan BACILOS o BASTONES y presentan otros modelos de agrupación. Así
tenemos:
* bastones en cadena
-------------------------------- Ej. Bacilllus Las bacterias helicoidales (espiral)
se presentan en general como células individuales, independientes; pero las células
de las distintas especies presentan notables diferencias de longitud, número y
amplitud de las espiras y rigidez de la pared. * observando los microorganismos
vivos sin teñir. Las bacterias vivas, en suspensión acuosa tienen propiedades ópticas
similares a las del agua y, por lo tanto, son difíciles de observar con el
microscopio de campo claro debido a la falta de contraste con el medio que las
rodea. En los casos en los que se quieren observar los microorganismos vivos es
conveniente usar un microscopio de campo de contraste de fases o en su defecto
un microscopio de campo claro en iluminación mínima. Ésta se logra bajando el
condensador minimizando la iluminación.
El movimiento de traslación de algunas
bacterias puede observarse en preparaciones húmedas del material, es decir con
los microorganismos vivos. Debe distinguirse claramente el movimiento
independiente de las bacterias móviles del movimiento por arrastre con
corrientes de convección y el movimiento browniano de las bacterias inmóviles.
Cuando el movimiento se realice por propulsión flagelar, el tipo de movimiento
variará con la disposición de los flagelos en el cuerpo celular.
Aunque las bacterias no difieren en sus
propiedades ópticas del medio externo, si son muy diferentes desde el punto de
vista químico; esto es lo que permite distinguir las bacterias por tinción,
pues generalmente el colorante reacciona con la célula bacteriana pero no lo
hace con el medio.
La coloración de las bacterias
tiene como fines:
* aumentar el contraste de las células
con el medio que las rodea. Esto implica mejorar la visualización de las
bacterias y permitir la distinción de formas y tamaño. Los colorantes utilizados son sales en las
que el anión o el catión es el responsable del color; en el primer caso se
trata de un colorante ácido o aniónico y en el segundo, básico o catiónico.
La célula bacteriana tiene una débil carga negativa cuando el medio externo
tiene un pH cercano a la neutralidad. Como la diferencia de carga eléctrica es
lo que determina la afinidad entre el colorante y la célula, las bacterias
tendrán afinidad por los colorantes básicos (ej.: cristal violeta y azul de
metileno).
Cuando se utiliza un solo colorante básico
el método se denomina coloración simple, mientras que se llama coloración
compuesta cuando se usan dos o más; la coloración diferencial es un caso
particular de coloración compuesta.
Cuando a una preparación bacteriana se le
aplica un colorante ácido tal como eosina y la nigrosina, este no se une a las
células cargadas negativamente, pero si se deposita alrededor de ellas quedando
así un fondo coloreado donde contrastan las células incoloras. No es, por lo
tanto, una verdadera tinción y se denomina tinción negativa o indirecta.
En algunas ocasiones es necesario
utilizar un mordiente, es decir, alguna sustancia que contribuya a la fijación
del colorante a la célula, por ejemplo: ácido tánico, sales de Al, Fe, etc.
1) extendido del material en un
portaobjetos transparente El propósito de la fijación es matar los
microorganismos, coagular el protoplasma de la célula y adherir la preparación
al portaobjetos. Sin el proceso previo de fijación se lavaría la capa de células
durante el proceso de tinción. Una vez fijada una preparación,
puede emplearse para teñir las células los siguientes colorantes básicos:
azul de metileno, cristal violeta o fucsina fenicada. Estos presentan diferente
afinidad por las bacterias y por ello los tiempos de aplicación serán
distintos.
La tinción simple se basa en que
las células bacterianas difieren desde el punto de vista químico de su medio
externo y por eso se tiñen, contrastando con el. Los microorganismos también
difieren física y químicamente entre si y por eso reaccionan de una manera
diferente frente a un determinado proceso de tinción. Esto constituye el
fundamento de las tinciones diferenciales. En los Gram - el complejo es extraído por
el alcohol mientras que en los Gram + no. Las bacterias Gram + poseen paredes
gruesas de peptidoglicano, se deshidratan por el alcohol. Esto provoca que se
cierren los poros de la pared, impidiendo que el complejo iodo-cristal violeta
se escape. En las bacterias Gram -, la fina capa de peptidoglicano no evita el
pasaje del solvente y el escape del complejo yodo-cristal violeta de la célula. Las levaduras, que poseen una pared
celular gruesa pero de una composición química totalmente diferente, se tiñen
como Gram +. No son los constituyentes químicos, sino la estructura física de
la pared lo que le confiere la Gram positividad.
* cocos en cadena
---------------------- Ej. Streptococcus
* cocos en racimo
---------------------- Ej. Staphylococcus<
* cocos en tétradas
-------------------- Ej. Pediococcus
* cocos en cubos
----------------------- Ej. Sarcina>
* cocos sin distribución especial
* bastones en letras chinas o
empalizadas ------------ Ej. Corynebacterium
* bastones sin distribución especial
DESCRIPCION DE
LA MORFOLOGÍA DE COLONIAS DE BACTERIAS
OBSERVACION Y EXAMEN
MICROSCOPICO
La observación y examen de las
bacterias se puede realizar de dos maneras fundamentales:
* observando las células fijadas, teñidas
con colorantes
Este contraste aumenta cuando se tiñen las bacterias, con lo que se hacen más
visibles. Sin embargo, para muchos fines es preferible evitar la coloración
debido a que frecuentemente altera y mata a las células.
* diferenciar grupos bacterianos por su
reacción frente a determinados colorantes.
* revelar la presencia de distintas
estructuras internas.
Preparación
de un frotis
Comprende las siguientes etapas:
2) secado
3) fijación
El agente fijador ideal preserva las
estructuras de la célula con su forma y posición sin que aparezcan estructuras
que no existían en la célula original.
El calor es el método de fijación utilizado
para la observación de la morfología de células microbianas. Cuando además
de los microorganismos interesa la observación de células animales, se utilia
un método químico como la fijación por metanol y por formol que altera menos
que el calor, la morfología de las células animales.
La tinción de Gram, la más empleada
en bacteriología, es una tinción diferencial. Por este método se clasifican
las bacterias en dos grupos: Gram positivos (Gram +) y Gram negativos (Gram -),
en función de su reacción frente a la coloración.
Según este procedimiento, las células
previamente fijadas, se tiñen con solución de cristal violeta, se lavan y se
tratan con lugol. El iodo forma un complejo con el cristal violeta, que sirve
para fijar éste a la célula. Luego se agrega un agente decolorante (alcohol,
acetona o mezclas de ambos) en el cual el complejo iodo-cristal violeta es
soluble.
Algunos microorganismos son decolorados Gram
- mientras que otros no Gram +. Luego de lla decoloración se aplica un colorante
de contraste, generalmente safranina, que hace visibles los microorganismos Gram
- que habían sido decolorados. Cuando se oobserva una preparación así teñida
se ven bacterias azul violeta Gram+ y rosadas Gram-.