หน้าที่ 1 l 2 l 3 l
กลับไปหน้าหลักครับ
การแยกดีเอนเอจากสิ่งมีชีวิตครับ
การเพิ่มดีเอนเอในหลอดทดลองครับ
บทปฏิบัติการครับ
คระผู้จัดทำครับ
คลิกเพื่อออกความคิดเห็นครับ


 

บทปฏิบัติการ

ตอนที่ ๑ การสกัดดีเอนเอจาก Escherichia coli

วัตถุประสงค์

1. เพื่อศึกวิธีการสกัดดีเอนเอจาก Escherichia coli
2. สามารถวิเคราะห์คุณภาพและปริมาณดีเอนเอที่สกัดได้

วัสดุอุปกรณ์

1. Micropipette พร้อม tip
2. หลอดเซ็นตริฟิวจ์ขนาด ๒ มิลลิลิตร
3. อ่างน้ำควบคุมอุณหภูมิ (waterbath)
4. เครื่องหมุนเวี่ยงความเร็วสูงแบบตั้งโต๊ะ(microcentrifuge)

สารเคมี

1. Boric acid
2. Di-sodiam hydrogen phastphate anhydrous
3. Ethylene diamine tetraacetic (EDTA)
4. Potassium di-hydrogen phastphate
5. Tris base
6. เชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli
7. อาหารเลี้ยงเชื้อ LB broth (bacto-tryptone, yeast extract, NaCl)

วิธีการเตรียมตัวอย่างดีเอนเอต้นแบบ (DNA template)

1) เตรียมหลอดทดลองขนาด ๒ มิลลิลิตร PBS ๑ มิลลิลิตรแล้วดูดเชื้อแบคทีเรียจาก LB broth ๑ มิลลิลิตร
2) ปั่นเหวี่ยงที่ความเร็ว ๑๒,๐๐๐ รอบ/นาที เทสารละลายด้านบนทิ้ง เติมบัฟเฟอร์ TE ๑๐๐ ml
3) นำหลอดทดลองจากข้อ ๒ ต้มให้เดือด(อุณหภูมิประมาณ ๙๕ องศาเซลเซียส) นาน ๕-๑๐ นาทีแล้วนำมาแช่ในน้ำแข็ง
4) เจือจางสารละลายดีเอนเอ โดยดูดสารละลายดีเอนเอจากข้อ ๓ มา ๑๐ ml ผสมกับบัฟเฟอร์ TE ๙๙๐ml นำไปเป็นดีเอนเอต้น แบบสำหรับ PCR reaction

ตอนที่ ๒ การเพิ่มปริมาณดีเอนเอในหลอดทดลอง PCR

วัตถุประสงค์

1) เพื่อศึกษาวิธีการเพิ่มปริมาณดีเอนอเโดยเทคนิคพีซีอาร์
2) สามารถวิเคราะห์คุณภาพและปริมาณผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ (PCR product)

วัสดุอุปกรณ์

1) PCR thermal Cycler
2) Micropipette
3) Microcentrifuge tubes ขนาด ๐.๒ และ ๐.๕ ml
4) Mini-Microcentrifuge


Created by Suhaiming Moksu (Ming)
Contact webmaster : suhaiming@muslimthai.com

หน้าหลัก l การแยกดีเอนเอจากสิ่งมีชีวิต l การเพิ่มดีเอนเอในหลอดทดลอง l บทปฏิบัติการ l ผู้จัดทำ