Purification Of Viruses

 

الغـــرض:

الحصول على تحضيرات أو معلقات من الفيروس خالية من مكونات الخلايا وخاصة البروتينات.

الفائـــدة:

تفيد التحضيرات المنقاة من الفيروسات في دراسة صفات وخواص الفيروسات وأشكالها بالصور المأخوذة بالميكروسكوب الإلكتروني.

النظرية الخلفية لتنقية الفيروسات:

حيث أن البروتين هو المكون الأساسي الغالب في الفيروسات لذلك تعتمد طرق تنقية الفيروسات على الطرق المستخدمة في دراسة كيمياء البروتين.

هناك ثلاثة طرق رئيسية مختلفة يمكن إستغلالها لتنقية وعزل البلورات الفيروسية مما يشوبها من مواد أخرى دخيلة.  

 

(أولاً) الطرق الكيميائية:  

تتضمن الطرق الكيميائية لتنقية الفيروسات عدة وسائل منها:

1- الإزاحة الملحية:        Salting out

تعمل بعض الأملاح مثل كبريتات النشادر Amonium sulphate عند إضافتها بتراكيز مختلفة على ترسيب البروتينات في المحاليل المضافة اليها. ويتميز كل بروتين بأنه يزاح عند درجة تركيز خاصة من الملح مما يهيئ وسيلة خاصة وفعالة للتمييز بين الطرز المختلفة من البروتين وعلى سبيل المثال فأنه يمكن ترسيب بروتين البيومين المصل Serum albumin وهو أحد بروتينات السيرم بإضافة محلول كبريتات النشادر ليصبح تركيزه في المحلول 100% أما إضافة كبريتات النشادر بتركيز 50% فأنه يمكن ترسيب بروتين الجلوبيولين المصلي Serum globulin.

2-     الترسيب بالكحول أو ضبط الرقم الهيدروجيني pH

يمكن ترسيب الفيروسات إما بإضافة الكحول أو ضبط الرقم ألأيدروجيني للمعلق الفيروسي عند نقطة التعادل الكهربي Iso electric point  حيث يكون البروتين عند أقل درجة ذائبية.

3-     ألإمتزاز أو الإدمصاص والإستخلاص Adsorption and elution

مـواد غروية = Amonuim hydroxide

          Calsium hydroxide

تؤدي الي إمتزاز الفيروسات من المحاليل الموجودة فيها ثم إستخلاص الفيروسات من السط الممتز ببعض المواد الكيميائية الأخرى مثل أيدروكسيد النشادر

فيروس القدم والفم في الماشية Foot and mouth disease

فيروس شلل الأطفال         Polymilitis

إستخدام مادة غروية Kaolin bed لإدمصاص فيروس X الذي يصيب البطاطس عند رقم هيدروجيني 5.9 بينما يمر فيروس Y في الراشح.  

4-     الترسيب بإستخدام كبريتات البروتامين Protamine sulphate

تستخدم هذه الطريقة لترسيب الفيروسات ذات الحجم الكبير التي تزيد أقطارها عن 50 ملليميكرون.

(ثانياً)     الطرق الطبيعية          Physical methods

  1-     الطرد المركزي

إستخدام جهاز الطرد المركزي الفوقي Ultra-centrifuge  (50000 لفة/الدقيقة).

تستخدم لتعيين أحجام الفيروسات.  

2-     ألأغشية الكلودينية     Collodion filtres

أغشية ذات درجات مسامية مختلفة بعضها يسمح للفيروسات بالمرور بينما لايسمح الأخر بالنفاذ وبالتالي يمكن تركيز الفيروس على المرشح الثاني بينما يقوم الأول بعملية التنقية مما يشوب الفيروس من مكونات الخلايا.    

(ثالثاً)     الطرق المعتمدة على المميزات الفردية للفيروسات:

1-     المعاملة بالإنزيمات المحللة للبروتين.  

2-     ألإمتزاز على كريات الدم الحمراء عند درجة حرارة 37م والإستخلاص ثم فصل كريات الدم الحمراء عن الفيروسات بواسطة الطرد المركزي.

3-     ألإمتزاز على راتنجات متبادلة الكايتون مثل Dowex and Sephadex والإستخلاص

 

 ألإختبار الحيوي Bio assay ومدى كفاءة الطريقة المستخدمة في التأثير على الفيروسات.  

 

    المحاضــرة التالية

   المحاضرة الخامسة

   المحاضرة الرابعة

   المحاضرة الثالثة

   المحاضرة الثانية

   المحاضرة التاسعة

   المحاضرة الثامنة

   المحاضرة السابعة

   المحاضرة السادسة

   الصفحة الرئيسية

المقــررات الدراسية

المحاضرة الحادية عشر

   المحاضرة العاشرة