หน้าแรก | บทคัดย่อ | ที่มาและความสำคัญ | วิธีดำเนินการทดลอง | ผลการทดลอง

อภิปรายผลการทดลอง | สรุปผลการทดลอง | ปัญหาและข้อเสนอแนะ | เอกสารอ้างอิง

จากการทดลองนำเชื้อไปเลี้ยงที่อุณหภูมิ 45 องศาเซลเซียส แล้วไม่พบว่ามีเชื้อขึ้น เป็นไปได้ว่า อุณหภูมิดังกล่าวไม่เหมาะสมต่อการเจริญเติบโตของยีสต์ที่ได้จากเกสรดอกไม้จากการทดลองครั้งนี้ แต่พบยีสต์ที่ผลิตเอนไซม์ไลเปสที่แยกได้จากเกสรดอกไม้ เมื่อนำไปเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเท่านั้น ซึ่งอุณหภูมินี้เหมาะแก่การเจริญเติบโตของยีสต์มากกว่า อาหารเลี้ยงเชื้อ Oil emulsion Double – Layers agar plate (ODL medium) ที่ใช้ในการทดลองครั้งนี้ ได้ออกแบบมาเพื่อให้ง่ายต่อการตรวจสอบการสร้างเอนไซม์ไลเปส โดยอาหารที่ใช้คัดเลือกนี้มีสองชั้น คือชั้นล่างมีลักษณะใส เนื่องจากไม่มีส่วนประกอบของ olive oil emulsion ส่วนชั้นบนมีส่วนประกอบของ olive oil emulsion ซึ่งมีลักษณะขุ่น ทำให้สังเกต clear zone เร็วขึ้น นอกจากนี้ยังช่วยลดค่าใช้จ่ายในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้ออีกด้วย ลักษณะ clear zone ที่เกิดขึ้น เกิดจากยีสต์สร้างเอนไซม์ไลเปสออกมาย่อยสลายเม็ดน้ำมัน (oil emulsion) รอบ ๆ โคโลนี สำหรับน้ำมันที่ใช้ในการทดลองครั้งนี้เลือกใช้ olive oil เพราะหาง่ายและมีราคาถูก หาซื้อได้ตามท้องตลาดทั่วไปจะเห็นได้ว่ายีสต์ที่ตรวจกรองจากเกสรดอกไม้มีปริมาณน้อย ดังนั้นจึงต้องมีการทำให้เข้มข้นขึ้นด้วยการนำสารละลาย normal saline ที่ผสมเกสรดอกไม้ไปปั่นเหวี่ยงให้ได้เซลล์ยีสต์ปริมาณมากพอและมีโอกาสในการพบยีสต์ที่ผลิตเอนไซม์ไลเปสมากขึ้น หากไม่มีการทำให้เข้มข้นขึ้นอาจทำให้สูญเสียยีสต์ที่ผลิตเอนไซม์ไลเปสไป


ก่อนดำเนินการจัดจำแนกยีสต์ ต้องมีการทำให้เชื้อที่แยกมานั้นเป็นเชื้อที่บริสุทธิ์ไม่มีการปนเปื้อนเชื้อชนิดอื่น โดยการ streak plate จนได้โคโลนีเดี่ยว ๆ เพื่อไม่ให้ผลการทดลองผิดพลาด และจะต้องมีการเลี้ยงเชื้อใน YPD ก่อนเป็นเวลา 24 – 48 ชั่วโมง เพื่อให้ได้เชื้อที่ยังมีชีวิตอยู่ และต้องมีการทำซ้ำ และควรทำควบคู่ไปกับ control เสมอ เพื่อเป็นสิ่งยืนยันว่า ผลการทดลองนั้นน่าเชื่อถือ

จากการทดลองพบว่า ยีสต์ control (Saccharomyces cerevisiae) มีหน่อเล็ก ๆ เกิดขึ้นที่ตำแหน่งต่าง ๆ แสดงว่ามีการแตกหน่อรอบเซลล์ (multilateral budding) เมื่อย้อมสีย้อมสปอร์ พบว่าติดสีเขียวและมีลักษณะกลม ๆ ติดกัน 3-4 เซลล์แสดงว่า มีการสร้างสปอร์รูปกลม (spherical) ไม่พบเชื้อเจริญใต้วุ้น แสดงว่าไม่สร้างไมซีเลียม อาหารเลี้ยงเชื้อที่มี galactose, glucose, maltose และ sucrose เปลี่ยนจากสีฟ้าอมเขียวเป็นสีเหลือง และมีก๊าซเกิดขึ้นในหลอดดักก๊าซ แสดงว่ามีการ ferment ส่วนอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี lactose ไม่มีการเปลี่ยนสี และไม่มีก๊าซเกิดขึ้นแสดงว่าไม่มีการ ferment lactose และเชื้อที่เลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีไนเตรตและ inositol ยังคงใสเหมือนเดิมแสดงว่าเชื้อไม่สามารถใช้ ไนเตรตและ inositol ในเจริญเติบโตได้ ซึ่งลักษณะทั้งหมดนี้เป็นลักษณะของ Saccharomyces cerevisiae ซึ่งใช้เป็นเชื้อ control ของการทดลองนี้ ดังนั้นจึงเป็นสิ่งแสดงว่า คุณภาพของอาหารเลี้ยงเชื้อและวิธีการทดลองถูกต้อง

ยีสต์ที่พบจากเกสรดอกไม้ 3 ชนิด พบว่า มีหน่อเล็ก ๆ เกิดขึ้นที่ตำแหน่งต่าง ๆ แสดงว่ามีการแตกหน่อรอบเซลล์ (multilateral budding) เมื่อย้อมสีย้อมสปอร์พบว่าไม่ติดสีเขียวของสีย้อมสปอร์ แสดงว่าไม่มีการสร้างสปอร์ และไม่พบเชื้อเจริญใต้ผิววุ้น แสดงว่าไม่มีการสร้างไม่สร้างไมซีเลียม และในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี galactose, glucose, lactose, maltose และ sucrose ไม่มีก๊าซเกิดขึ้นแสดงว่าไม่ ferment น้ำตาลดังกล่าว เมื่อสังเกตการเปลี่ยนสีพบว่าเชื้อทั้ง 3 ชนิดมีการเปลี่ยนสีของน้ำตาลแต่ละชนิดไม่เหมือนกัน แสดงว่าเป็นยีสต์ต่าง species กัน และมี ฟิล์มบาง ๆ ขึ้นที่ผิวของอาหาร แสดงว่าเป็นพวกที่ต้องการออกซิเจนในการเจริญเติบโต เชื้อทั้ง 3 ตัวอย่าง ที่เลี้ยงในอาหารที่มีไนเตรต ยังคงใสเหมือนเดิมแสดงว่า ยีสต์ทั้ง 3 ตัวอย่างนี้ ไม่สามารถใช้ไนเตรตในการเจริญเติบโตได้ เชื้อทั้ง 3 ตัวอย่าง ที่เลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี inositol อยู่ ขุ่นขึ้นแสดงว่าเชื้อทั้ง 3 ชนิดนี้ สามารถใช้ inositol ในการเจริญเติบโตได้ ซึ่งลักษณะทั้งหมดนี้เป็นลักษณะของ ยีสต์ใน genus Candida